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氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

作者:admin 来源:网络日期:2009-3-4 5:54:57

3讨论

他汀类药物是3羟基3甲基戊二酰辅酶A（3hydroxy3methylglutarylcoenzymeA，HMGCoA）还原酶的抑制剂。这类药物降血脂作用明显，抗动脉粥样硬化作用肯定，现已成为治疗高脂血症的首选药物。近年来国内外许多学者研究显示，他汀类药物具有多向性效应，除降低血脂作用外，还具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡及分化、降低肿瘤细胞侵袭转移能力等作用，但对正常细胞无明显毒副作用，很可能成为一种具有应用前景的抗肿瘤药物，他汀类药物抗肿瘤作用及机制成为近年研究的热点之一〔2，5，6〕。本研究的结果表明，用不同浓度氟伐他汀处理Lewis肺癌细胞1～4d后，能明显抑制Lewis肺癌细胞增殖，且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长，这种抑制作用随之增强。本研究还采用CCK8试剂检测氟伐他汀对细胞生长的抑制作用。CCK8法试剂单一，操作比MTT法简便，试剂中所含WST8被活细胞线粒体中脱氢酶还原为水溶性黄色甲臜，生成的甲臜量与活细胞的数量呈正比。本研究结果显示，随着氟伐他汀浓度的增加，细胞生长抑制率逐渐升高，呈剂量依赖关系，其中10和20μmol/L氟伐他汀抑制细胞生长的作用最明显。随着氟伐他汀作用细胞时间的延长，细胞生长抑制率逐渐升高，处理48和72h后，细胞生长抑制率进一步增加，呈时间依赖关系。这些研究结果提示，一定浓度的氟伐他汀及作用一定时间后，能明显抑制小鼠Lewis肺癌细胞的增殖和生长；同一浓度的氟伐他汀随着作用时间的延长，抑制作用也随之加强。

本研究通过AnnexinVFITC/PI染色法证明，氟伐他汀具有诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用。正常细胞中磷脂酰丝氨酸（phosphatidylserine）仅存在于细胞膜内表面，在细胞凋亡早期阶段，磷脂酰丝氨酸发生外翻，暴露于细胞膜外表面。AnnexinⅤ不能通过正常细胞膜，但可与外翻的磷脂酰丝氨酸结合。AnnexinⅤ标记有异硫氰酸荧光素（FITC），作为探针检测暴露于胞膜表面的磷脂酰丝氨酸；碘化丙锭（PI）不能透过活细胞、早期凋亡细胞的细胞膜，但可以透过凋亡中期、晚期和死细胞的细胞膜使细胞核红染。细胞用AnnexinⅤFITC/PI双染后，利用流式细胞术可以同时快速、灵敏地检测出早期凋亡细胞、正常活细胞、晚期凋亡细胞或坏死细胞〔7〕。在获得的由4个象限组成的细胞直方图上，第4象限代表早期凋亡细胞（AnnexinⅤ+/PI-）。本研究结果表明，与未处理的细胞比较，经氟伐他汀处理的Lewis肺癌细胞出现明显磷脂酰丝氨酸外翻现象，即AnnexinⅤ+/PI-代表的早期细胞凋亡率明显增高（4.37%vs12.83%，P＜0.01)；但当用氟伐他汀与甲羟戊酸共同作用Lewis肺癌细胞后，早期细胞凋亡率又明显降低，已接近未处理Lewis肺癌细胞的水平（4.37%vs5.89%，P＞0.05)。

近年分子生物学研究表明，他汀类药物的某些非调脂机制与抑制甲羟戊酸途径（mevalonatepathway），进而减少其下游产物的合成有关〔8〕。由甲羟戊酸代谢产生的类异戊二烯中间产物FPP、GGPP在特异性转移酶的催化下，发生异戊二烯化，可激活小G蛋白使其具有生物活性。正常情况下，只有经过异戊二烯化的小G蛋白才能固定于浆膜的内侧面并具有生物学活性。甲羟戊酸是HMGCoA还原酶反应的重要产物，他汀类药物能抑制甲羟戊酸及其下游产物的生成，阻断蛋白质翻译后的异戊二烯化加工，干扰小G蛋白Ras介导的细胞内信号传导，从而影响细胞的生长、增殖和凋亡等活动〔2，9〕。抑制类异戊二烯合成，进而抑制小G蛋白Rho、Ras、Rac的活性，在介导他汀类药物的生物学效应中具有重要作用。基于上述研究和初步临床试验，近年已将抑制甲羟戊酸途径作为抗癌治疗的新靶点，具有重要应用意义〔10〕。

本研究结果提示氟伐他汀诱导Lewis肺癌细胞凋亡的作用是通过甲羟戊酸途径介导的，这可能是氟伐他汀诱导小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的重要分子机制之一。http://www.dxlww.net代写论文网

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