大鼠腹主动脉缩窄模型的制备及其效果的探讨
- 作者:admin 来源:网络 日期:2009-3-4 6:01:42
- 【摘要】目的改进大鼠腹主动脉缩窄模型的制备术式并探究对大鼠腹主动脉的合适缩窄程度。方法对两组大鼠分别施行传统术式与改良术式，然后用改良术式将另外4组大鼠的腹主动脉内径分别缩窄至0.5、0.6、0.7和0.8mm，对比评价各组的存活率以及造模效果。结果①改良组大鼠术后存活率90.00%(27/30)显著高于传统组66.67%(20/30)；②0.8mm组大鼠存活率86.67%(26/30)显著高于0.7mm组63.33%(19/30),0.6mm组43.33%(17/30)及0.5mm组3.33%(1/30)；③0.8mm组与0.7mm组两组间大鼠的平均动脉压、左心室重量指数、左心室室壁厚度以及心肌细胞直径均无显著差异。结论采用改良术式将腹主动脉在结扎点处的内径缩窄至0.8mm，与将其内径缩窄至0.7、0.6或0.5mm相比，能在不影响造模效果的前提下，可提高大鼠模型的存活率。
【关键词】腹主动脉；大鼠；模型；心肌肥厚
在高血压及病理性心肌肥厚的研究领域，有多种大鼠模型可供利用，制备方法包括L硝基精氨酸甲酯(LNAME)灌饲法、皮下注射血管紧张素II法、结扎一侧肾动脉法以及腹主动脉缩窄法等。特别是后者，由于通过手术的方法造成了腹主动脉的机械性狭窄，直接导致心脏射血的后负荷增加，从而形成了不易受药物影响的稳定的高血压，故较其他造模法更有利于高血压与心肌肥厚关系的研究〔1〕。目前，在制备腹主动脉缩窄模型时，研究者多沿用传统造模术式〔2～4〕，并将腹主动脉的内径缩窄至0.7mm〔5～7〕。但由于传统术式所造成的术中创伤以及术后过于剧烈的血流动力学变化，使术后大鼠的存活率偏低。基于此，我们对制备该模型的一种改良术式进行了探讨；并用改良术式将4组大鼠腹主动脉在结扎点处的内径分别缩窄至0.5、0.6、0.7和0.8mm，通过对各组存活率和造模效果的比较，探讨对大鼠腹主动脉的合适缩窄程度。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物14～16w龄雄性近交系SpragueDawley大鼠(河北医科大学实验动物中心提供)，体重250～270g，标准颗粒饲料喂养。按照随机排列表和随机数字表将大鼠随机分组：①传统（术式）组和改良（术式）组，每组各30只；②0.5、0.6、0.7和0.8mm组和假手术组(只分离出腹主动脉而不做缩窄处理)，每组各30只；③术后4w，在0.7、0.8mm组和假手术组中各随机选择8只存活的大鼠，对比评价该3组大鼠的血压值及心肌肥厚程度。
1.1.2主要试剂与仪器戊巴比妥钠、氯化钾购自Sigma公司。主要设备包括LEICARM2125型切片机、RM6240B多道生理信号采集处理系统、TD600真彩色病理显微图像分析系统、电子称量记数天平及洁净动物柜等。
1.2方法
1.2.1传统术式与改良术式
1.2.1.1传统术式4%戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉(40mg/kg)，仰卧位固定大鼠，于腹部正中剑突下作一长2～3cm的纵行切口，入腹腔后牵开腹部脏器以暴露术野，探寻腹主动脉，在腹主动脉发出右肾动脉的分支点的上方约3mm处，分离出一小段腹主动脉，然后用4#缝合线将一根直径为0.8mm的钢丝和该段腹主动脉一起结扎，再迅速抽出钢丝，造成腹主动脉在结扎点处内径缩窄(即腹主动脉在结扎点处恢复再通的内径为所用钢丝的外径)。依次还纳各脏器，缝合腹壁，术毕。http://www.dxlww.net代写论文网
1.2.1.2改良术式对传统造模术式进行了改良，过程为：大鼠麻醉后采取左侧卧位，以右肾在右髂腰区体表投影的正中点为中点作一长2～3cm的纵行切口，依次切开皮肤、筋膜及肌肉，即可从腹膜后位直接暴露出右肾。剪开肾脂肪囊，向腹侧牵拉右肾，以暴露肾门背侧，可见到右肾动脉几乎呈直角由背侧横跨下腔静脉与腹主动脉相连。辨清腹主动脉发出右肾动脉的分支点，在分支点上方约2mm处，分离腹主动脉并进行缩窄操作，随后步骤同传统术式。
1.2.2使用不同直径的钢丝对腹主动脉进行缩窄操作采用改良术式，对4组大鼠依次使用直径为0.5、0.6、0.7和0.8mm的钢丝对腹主动脉进行缩窄操作。
1.2.3各组大鼠血压值及心肌肥厚程度的测量
1.2.3.1平均动脉压(MABP)的测定大鼠麻醉后，右颈总动脉插管，血压描记结果由RM6240B多道生理信号采集处理系统显示(正常大鼠MABP为90～100mmHg。
1.2.3.2左心室重量指数〔8〕（LVMI）的测定LVMI=左心室湿重/体重(mg/g)。麻醉后向大鼠腔静脉内注射10%氯化钾，使心跳停于舒张期，取大鼠心脏，游离出左心室(包括室间隔)，用生理盐水冲洗后，滤纸吸干左心室附带的液体，于电子称量记数天平上称重后计算LVMI。
1.2.3.3左心室室壁厚度〔9〕(LVWT)的测量用游标卡尺分别测量室间隔、左心室游离壁及心尖部室壁的厚度，取三者平均值作为LVWT的测量数据。
1.2.3.4心肌细胞直径〔10〕(DiameterofCardiacMyocyte，DCM)的测定在心尖与冠状沟之间的中点处(即左室前乳头肌在左室前壁的投影点)，沿着与左室长轴垂直的方向切断左心室，取含有心尖的部分。包埋后从左心室的断面处开始切片，切片厚度5μm，每隔20张切片取1张切片裱于载玻片上，共取3张切片，作HE染色，使用TD600真彩色病理显微图像分析系统进行细胞直径的测量。在每个切片中随机选择5个视野，在每个视野中随机测量8个心肌细胞的直径。测量时要求：①待测细胞边缘清晰、规则；②待测细胞的胞核明显，测量时令测量线过细胞核并与细胞核垂直。取所有测量值的平均值作为该只大鼠DCM的测量数据。
1.2.4统计学方法样本率的比较采用χ2检验(在进行多个样本率的两两比较时，使用“多个样本率两两χ2检验的显著性界值表”法〔11，12〕)；其他实验数据以x±s表示，多个样本均数的比较采用方差分析和SNK检验。
2结果
2.1传统组与改良组大鼠术后4w存活率的比较改良组大鼠术后存活率90.00%(27/30)显著高于传统组存活率66.67%(20/30)(χ2=4.81,P=0.028)。
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