ＡＢＣＡ１基因多态性与冠心病的相关研究
- 作者:admin 来源:网络 日期:2009-2-11 3:45:10
- ［摘要］目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP binding cassette transporter 1,ABCA1)基因R219K 多态性与冠心病(coronary heart disease, CHD)易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR_RFLP)方法检测了162例冠心病患者和186名对照的ABCA1基因R219K基因型和等位基因的分布。结果两组基因型频率均符合Hardy_Weinberg平衡。对照组的RK和KK基因型的频率显著高于CHD组（73.66%比56 .17%,P＜0.05），同样,对照组K等位基因的频率显著高于CHD组（48.66%比36.11% ，P＜0.01）。调整年龄、性别、体重指数、吸烟和高血压等因素后，携带至少1个21 9K等位基因的个体显著减少患冠心病的危险(OR=0.38;95% CI=0.22-0.65)。结论 ABCA1基因R219K多态性与中国温州汉族人群冠心病的遗传易感性相关，其中K 等位基因可能是冠心病的保护因子。
［关键词］冠心病;三磷酸腺苷结合盒转运子A1;多态性 流行病学研究显示低血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL_C)水平是冠心病独立的预测因子和重要的危险因素。血浆HDL_C水平受许多遗传和环境因素的影响，ABCA1活性是血浆HDL_C水平的一个重要决定因素［1］，ABCA1在胆固醇逆转运过程中起第一步限速作用［2］。近来，国外文献报道，ABCA1基因的某些单核苷酸多态性与CHD易感性有着一定的关联性 ,其中R219K多态性在不同人群中表现为与降低的CHD危险性相关［3,4］。本文探讨中国温州汉族人群冠心病患病风险和ABCA1基因R219K多态性的关系,并分析这个多态性对血脂的影响。
1 资料与方法
1.1 一般资料：病例为（2004年1月至2006年7月）温州医学院附属第一医院心血管内科住院的患者。冠心病组162例，其中男121例,女41例，年龄48～81(平均68.3±10.4)岁。冠心病组中74例为急性心肌梗死患者，急性心肌梗死的诊断标准符合中华医学会心血管病学分会2001年修订的《急性心肌梗死诊断和治疗指南》中的诊断标准［5］，其余病人均经冠状动脉造影证实，即左主干、右冠、左前降支、左回旋支中有一支以上狭窄≥50%。对照组186例，其中男123例,女63例，年龄45～76(平均63.5±10.3）岁。对照组中，52例为经冠状动脉造影排除冠心病的同期住院患者，其余对象为同期在我院体检中心体检的健康对照（均无冠心病史，心电图检查无冠心病证据，并且排除恶性肿瘤，免疫炎症性疾病和肝肾功能不全者）。所有的研究对象均来自汉族人群，无亲缘关系。
1.2 方法：
1.2.1血脂水平的检测：研究对象均采用空腹12h后抽取外周血5mL测定血脂水平。TG和T C(总胆固醇)采用氧化酶法测定,HDL_C、LDL_C(低密度脂蛋白胆固醇)用直接法测定。http://www.dxlww.net代写论文网
1.2.2 基因组DNA提取：抽取研究对象的空腹静脉血2ml,以EDTA抗凝。采用人类基因组D NA提取试剂盒(Gentra公司)从300ul全血中提取基因组DNA，然后放在-70℃下保存。
1.2.3 PCR和基因定型：PCR引物根据GENBANK所收录的全序列(登录号:NM-005502)并参照文献［6］,由上海生物工程公司合成,上游引物：5'_GCAAGGCTACCAGTTACATTTGACAAG _3',下游引物：5'_GATTGGCTTCAGGATGTCCATGTTGG_3'。反应使用Mastercyler 533型PCR扩增仪。P CR体系为20μl，含有基因组DNA0.2～0.6μg，上下游引物各0.5umol/L，0.2mmol/L的4 种dNTP，2.0mmol/L的MgCl2，1U Taq DAN聚合酶，10×buffer 2μl，用去离子水补充至 20μl。扩增程序为：94℃预变性4分钟；94℃变性1分钟、56℃退火30秒、72℃延伸45秒，共35循环；最后72℃延伸7分钟，扩增出大小为166bp的DNA片段。扩增产物用XagI特异性限制内切酶在37℃水浴消化4小时后，2.5%琼脂糖凝胶电泳并在凝胶成像系统里判断酶切结果。
1.3 统计学分析：用SPSS13.0软件包进行统计分析。计量资料的组间比较采用t检验，两组以上比较采用方差分析，计数资料的组间比较采用卡方检验。基因型和等位基因与冠心病的相关性采用比数比(OR,odds ratio)及其95%的可信区间(CI, confidence intervals)来表示，并用Logistic回归来排除年龄，性别，以及冠心病的其他危险因素的影响。检验水准采用P=0.05。
2 结果
2.1 两组临床资料比较：两组间性别构成比以及血浆TC、LDL_C、HDL_C水平差异无显著性，其余的均具有统计学差异。在多因素统计分析中对这些因素进行了校正，见表1。
2.2 基因型鉴定：含R219K多态性位点的PCR扩增产物长166bp，K等位基因存在限制性内切酶XagI切点,从而导致3种基因型的出现:RR型(无酶切位点的纯合子),酶切后长度仍为166 bp;KK型(存在酶切位点的纯合子),酶切产物为101bp和65bp两个片段;RK型(3种片段的杂合子 ),酶切产物为166bp、101bp、65bp的3个片段。2.3 基因型和等位基因频率比较:表2和表3示ABCA1基因型和等位基因在冠心病组和对照组中的分布情况。两组基因型的分布均符合Hardy_Weinberg遗传平衡定律。在162例冠心病人中，基因型的分布为RR71例，RK65例，KK26例；而186例对照中，基因型的分布为RR49例，RK93例，KK44例，两组分布具有显著性差异（x2=12.06,P＜0.01）。冠心病组R等位基因频率为63.89%，K等位基因频率为36.11%；对照组R等位基因频率为51.34%，K等位基因频率为48.66%，两组分布具有显著性差异(x2=11.13,P＜0.01)。调整年龄、性别、体重指数、吸烟和高血压等因素后，携带219KK基因型的个体较219RR携带者罹患冠心病的风险显著减少(OR=0.34;95%CI=0.18-0.69),而携带至少1个219K等位基因的个体也显著减少患冠心病的危险(OR=0.38;95% CI=0.22-0.65)。
2.4 不同基因型患者间血脂水平的比较:将正常对照组分成K等位基因携带者和非携带者两个亚组,比较两个亚组间血清血脂成分水平的差异。K非携带者血清TG和LDL_C高于K携带者， K 携带者HDL_C高于K非携者，两型比较均未见显著统计学意义（P＞0.05），见表4。
3 讨论
本研究在中国温州汉族人群中进行ABCA1基因R219K多态性与冠心病遗传易感性的关联研究。研究人群ABCA1基因R219K多态性的分布符合Hardy_Weinberg遗传平衡定律，表明该人群具有较好的代表性。本文结果显示，正常对照组R219K位点（RK+KK）基因型和K等位基因显著高于冠心病组,提示K等位基因携带状态是冠心病发病的一个保护因子,K等位基因携带者血清 HDL_C水平高于RR基因型者，但未达显著统计学意义。
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